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液相色谱仪的配置及应用

* 来源: 无锡赛那尔 * 作者: sainaer * 发表时间: 2020-09-11 8:55:54

  液相色谱仪是指利用混合物在液-固或不互溶的两种液体之间分配比的差异,对混合物进行先分离,而后分析鉴定的仪器。液相色谱仪的基本配置有:①输液泵;②手动进样阀;③色谱柱;④检测器。

输液泵的应用

  液相色谱仪输液泵一般由入口单向阀、出口单向阀、注塞杆、泵密封圈等组成,是液相色谱仪的重要组成部分,要保持泵的良好操作规程。必须维护系统的清洗,保证溶剂的纯度:

  (1)用高纯度的试剂和HPLC级溶剂;

  (2)过滤流动相和溶剂;

  (3)脱气;

  (4)再次使用前放空脱气,工作结束从泵中洗去缓冲液(Z好另外清洗柱塞);

  (5)不让水或腐蚀性溶剂滞留泵中;

  (6)定期更换泵垫圈;

  (7)查阅有关泵的操作手册。


手动进样阀的应用

  1、液相色谱仪正确的进样方式

  (1)手动进样阀在INJECT位置:把取存试液的进样针导入进样孔,直到插入为止(必须穿过转子密封圈聚四氯乙烯套管);

  (2)转动手柄到load位置:把试液放入阀体中的定量环里;

  (3)同时转动手柄到INJECT位置:试液进入液路。

  2、进样前样品处理及注意事项

  (1)须用专用平头液相专用注射器进样(禁用气相尖头进样针);

  (2)进样试液应无颗粒、浑浊和乳化,使用前先用超声波溶解后,须用0.45um的过滤膜过滤;

  (3)部分装取样时,取样体积一般小于定管的50%,完全装液相取样体积取必须是定量环的5倍以上(特别是高要求分析中外标定量);

  (4)如流动相使用缓冲盐(或酸性、碱性)在使用结束时必须用蒸溜水在load和INJECT位置反复冲洗干净,因盐析出会损害转子、定子密封圈。

  3、液相色谱仪进样阀故障及维护

  (1)在进样针与进样阀不相配(针外径偏小)情况,可以用铅笔的橡皮头将针导管压入少许,使密封环变小达到严格密封;

  (2)转子密封圈漏液的维护:

  ①转子密封圈少量漏液,拧松手柄六角螺钉,手柄沿轴方向送进,使手柄里的突出部嵌入压力调整螺钉缺口,旋转手柄1/20圈,直到不漏液为止;

  ②转子密封圈损坏,通过方法①还漏液则需要更换转子密封圈。

  拧下三个定子螺钉,从主体上卸下转子密封圈,用手柄拧松压力调整螺钉半圈,安装上三个定子螺母均等地牢牢拧紧,再来调整压力螺丝拧到原来红色标记位置。

液相色谱柱的应用

  1、正确的使用方法

  (1)液相色谱仪进样的试样Z好称量,超声波溶解,样品过滤器过滤后进入色谱;

  (2)在有条件情况下,Z好一个样品使用一支色谱柱,可延长柱使用寿命;

  (3)色谱柱在使用后必须冲洗干净后方可保存过夜;

  (4)对于使用酸、碱、缓冲盐的流动相,柱子必须用蒸溜水(含5%有机溶剂)冲洗干净,再用甲醇、乙腈冲洗保护(对反相柱)。

  2、色谱柱的维护

  (1)流动相所用试剂尽可能是色谱纯试剂,水Z好是超纯水或全玻璃双重蒸溜水;

  (2)流动相使用前用溶剂过滤器除去可能存在的微粒,流动相应现用现配。对含盐的流液尤其应注意长时间会产生细菌或出现沉淀;

  (3)柱子在使用过程中会产生:①塔板数下降;②峰形变差;③压力增加;④保留时间变化。

  为使液相色谱仪柱子使用寿命延长:每天使用完后必须当天冲洗干净;压力增大时,可能是过滤筛板污染,可以将柱头螺母卸下取出滤片并将其在20%的硝酸溶液里超声波清洗约15分钟,再用纯水超声波清洗10分钟,重新装入色谱柱;

  (4)色谱柱的再生

  ①反相柱分别用甲醇:水=90:10,纯甲醇,二氯甲烷做流动相依次冲洗,每次冲洗体积为柱体积的30倍,然后以相反顺序冲洗;

  ②正相柱分别用正己烷,异丙醇,二氯甲烷,甲醇做流动相依次冲洗,每次为柱体积的30倍,甲醇冲洗完以后再以相反的次序冲洗,至正己烷。注意使用流动相必须严格脱水。


紫外检测器的应用

  紫外检测器是液相色谱仪应用Z广泛的检测器,可测190-350mm光吸收变化,其结构基本部件:氚灯流通值和传感器等等。

  1、氘灯的注意事项

  (1)在开动液相色谱仪时Z好先开泵,等流入大致平衡后再开检测器,可以缩短氘灯使用时间,冲洗关机也一样。先关检测器,后冲洗;

  (2)在分析中没有较长时间间隔,可以不关检测器。

  2、流通池检测事项

  (1)流通池是各分离组分经色谱柱分离到检测器的通道。流通池应定期清洗检查,定期更换池垫圈;

  (2)流通池常见故障是产生气泡,噪音较大,流动相必须严格脱气,其次在液相色谱仪检测器出口加一较长背压管;

  (3)不相互溶的溶剂没有中间过渡会产生气泡,以及噪音变大,故必须用异丙醇过渡后再换上新的溶剂;

  (4)流通池本身污染程度可以在UV-254nn处检查,样品池和参比池的两处的光能量结果来判断。

  3、氘灯的更换

  (1)必须关闭检测器电源,等灯基本冷却后再操作;

  (2)氘灯使用可以通过检查实际使用时间和结合光能量来办;

  (3)氘灯更换必须戴手套,以防污染灯的表面产生噪声;

  (4)液相色谱仪灯座位置必须安装到位。

  4、流通池的清洗必须按照操作规程来处理

  (1)下池入口、出口、液路路管;

  (2)用带金属接头的注射器连接池进口端、出口端注入异丙醇;

  (3)回抽10毫升异丙醇通过池去掉残留流动相;

  (4)回抽10毫升蒸溜水;

  (5)回抽10毫升60mol/L,磷酸通过池去掉沉积物;

  (6)回抽20毫升蒸溜水;

  (7)用至少100毫升蒸溜水正向通过池入口。